การผสมเทียมแมว credit อาหารเสริมลดน้ำหนัก

adv อาหารเสริม

ในแมวการผสมเทียม จำเป็นเมื่อการผสมตามธรรมชาติไม่ประสบผลสำเร็จ ในระหว่างการผสมพันธุ์ตามปกติน้ำเชื้อของแมวจะเข้าไปอยู่ในช่องคลอด  การผสมเทียมเพื่อปล่อย อสุจิทำได้3 ตำแหน่งคือ ในช่องคลอด  ,ในมดลูก ,ในท่อนำไข่ จำนวนอสุจิมีความจำเป็นสำหรับการปฎิสนธิอาจจะแปลผันขึ้นอยู่กับตำแหน่งการผสม  อสุจิที่ใช้ผสมสามารถใช้ที่เก็บไว้ ภายใต้การแช่แข็งหรือเก็บไว้ชั่วคราวที่ 0°C  แมวเพศเมียที่ไม่มีประสบการณ์ในช่วงเวลาการเป็นสัดตามธรรมชาติ เมื่อเวลาที่ต้องผสมเทียมต้องใช้การเหนี่ยวนำการเป็นสัดโดยใช้ gonadotripic hormone | อาหารเสริมลดน้ำหนัก

                รายงานแรกที่ผสมเทียมในแมวโดย Sojka et al.  อสุจิจากน้ำเชื้อสดที่เก็บได้ใหม่ๆจะถูกผสมเข้าในช่องคลอด หลังจากนั้นการผสมน้ำเชื้อสดทำเช่นเดียวกับน้ำเชื้อแช่แข็งเข้าไปในช่องคลอด มดลูก และปีกมดลูก น้ำเชื้อของแมวถูกเก็บได้จากการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าและเก็บจาก artificial vagina (AV) โดยให้แมวหลั่งน้ำเชื้อออกมาเอง  อสุจิสามารถฟื้นตัวจาก epididymis โดย percutaneous epididymis  sperm aspiration (PESA) หรือ การเปลี่ยนย้ายการจัดเก็บจากด้านหลัง เข้ามาอยู่ตรงกลาของ epididymis ในวิธีการเก็บที่แตกต่างกันอาจมีผลต่อภาวะเจริญพันธุ์ จุดประสงค์ของงานวิจัยเพื่อ ทบทวนการผสมเทียมในแมวทั้งอดีตและปัจจุบันรวมถึงปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อความสำเร็จโดยเฉพาะอย่างตำแหน่งของอสุจิในระบบสืบพันธุ์ :อาหารเสริมลดน้ำหนัก

2. การผสมเทียมในช่องคลอด // อาหารเสริมลดน้ำหนัก //

                ในการผสมเทียมในช่องคลอด ทำลึกลงไปถึงช่องคลอด โดยใช้ fine needle โดยไม่ต้องวางยาสลบหลังการให้ hCGเพื่อเหนื่ยวนำการตกไข่ รวมทั้งรายงานเบื้องต้นในปี 1970 มีทั้งหมด3รายงานในแมวที่ ผสมเทียมที่ช่องคลอดโดย 2 รายงานใช้น้ำเชื้อสด และ 1 รายงานใช้น้ำเชื้อแช่แข็ง

 2.1 น้ำเชื้อสด //อาหารเสริมลดน้ำหนัก

ขายอาหารเสริมลดน้ำหนักหนึ่งสองสาม

                ใน 2 การศึกษาใช้น้ำเชื้อสด เหนี่ยวนำการตกไข่โดยให้ hCGในเพศเมียที่เป็นสัดตามธรรมชาติ การศึกษาแรกในการผสมเทียมส่งผลให้ประสบความสำเร็จในแมวเพศเมีย 1ใน3ตัว หลังได้รับอสุจิ1.2x10⁶  ตัว แต่ไม่ประสบความสำเร็จในอสุจิ0.5x10⁶ ตัว คิดเป็น54% ที่ได้รับหลังจากผสมเทียมด้วยอสุจิ5x10⁶ตัวและได้ลูกที่เกิดมา2-4ตัวต่อครอก ในรายงานเดียวกันทดลองเพียงเบื้องต้นทำเพื่อตรวจสอบว่าการผสมเทียมครั้งที่สองจะส่งผลให้อัตราการตั้งท้องสูงขึ้น ตัวเมีย8ตัวผสมด้วยอสุจิ 5x10⁶ตัวในเวลาของการรักษาด้วย hCG(50IU)และอีกครั้งใน24ชั่วโมงต่อมาซึ่งระดับ hCG(10 IU) ต่ำกว่าที่ได้รับ ติดตามผลพบตัวเมีย6ตัวที่ตั้งท้อง(75%)ซึ่งควรจะได้ถูกตีความเพื่อเป็นหลักฐานสนับสนุนสำหรับการศึกษาต่อในการผสมเทียมในช่องคลอดในแมว อย่างไรก็ตามแม้ว่ากว่าสามทศวรรษที่ผ่านไปนับตั้งแต่มีรายงานเบื้องต้นในการผสมเทียมในช่องคลอด มีเพียง2รายงานเพิ่มเติมในแมว การศึกษา2การศึกษาและการศึกษาอื่นๆในน้ำเชื้อสดถูกนำมาใช้ก็ไม่ได้ตีพิมพ์จนกระทั่ง 30 ปีหลังจากที่รายงาน ในการศึกษาล่าสุด การผสมเทียมเดียวที่ได้รับการปฏิบัติหลังจากให้ hCG 15,20หรือ 30 ชั่วโมง คิดเป็นอัตราดังต่อไปนี้ 1/6 (6%) ผสมด้วยอสุจิ 20 x10⁶ ตัว, 6/8 (34%)ผสมด้วยอสุจิ 40 x10⁶ ตัว และ7/9 (78%) ผสมด้วยอสุจิ 80 x10⁶ ตัว ไม่มีความสัมพันธ์กันระหว่างอัตราการผสมและเวลาในการให้ hCGในการผสมเทียม  ลูกแมวที่เกิด 3หรือ 4ตัวต่อครอกโดยไม่คำนึงถึงจำนวนของอสุจิที่ผสม แม้ Sojka et al. และ Tanaka et al. ใช้วิธีที่คล้ายกันสำหรับการผสมเทียม ผลจากการศึกษาชี้ให้เห็นว่าจำเป็นต้องมีจำนวนสเปิร์มที่สูงขึ้นเพื่อให้บรรลุอัตราการตั้งท้องที่น่าพอใจเมื่อเทียบกับที่ของรายงานเดิม อสุจิ 80 x10⁶ ตัว เทียบกับอสุจิ 5-50 x10⁶   ตัวตามลำดับ  กล่าวถึงก่อนหน้านี้ความแตกต่างระหว่างทั้ง2การศึกษาคือการระงับความรู้สึกที่ไม่ได้ใช้ในการรายงานเดิม ในขณะที่แมวในการศึกษาที่สองผสมเทียมโดยระงับความรู้สึก

2.2 น้ำเชื้อแช่แข็ง

                ในรายงานแรกของการผสมเทียมในแมว ที่ใช้น้ำเชื้อ แช่แข็งเป็นตัวอย่างที่ได้จากการเก็บไว้ในน้ำแช็งแห้งเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว เมื่อนำมาละลายได้ที่เคลื่อนไหว อสุจิ50-100 x10⁶   ตัว เป็นการผสมทางเข้าไปทางช่องคลอดในเพศเมียที่ทำให้หมดความรู้สึกในช่วง 2และ3วันของการเป็นสัดโดยใช้เข็มล้าง 16g(ยาว9ซม.) ติดอยู่กับเข็มฉีดยา 1 มล.ในช่วงเป็นสัดตามธรรมชาติ ตัวเมียบางตัวในขณะที่เป็นสัดตามธรรมชาติหลังเหนี่ยวนำให้ตกไข่โดย hCGและตัวเมียอื่นๆที่เหนี่ยวนำการตกไข่โดยFSHและ hCG ก่อนการผสมเทียม เกิดตั้งท้องผลังผสมเทียมในแมว  6ตัวจาก56ตัว(11%)  4 ตัวจากการเป็นสัดตามธรรมชาติและ2ตัวจากกลุ่มที่เหนี่ยวนำการเป็นสัด ลูกแมวที่เกิดทั้งหมด 12 ตัวที่มีขนาดครอก​​ตั้งแต่ 1-4 ตัว |adv (อาหารเสริมลดน้ำหนักสี่ห้าหก)

3. การผสมเทียมในมดลูก

การผสมเทียมภายในมดลูกในแมวได้รับการดำเนินการโดยการส่องกล้องทั้งสองข้างและ mid line laparotomy มีสี่การศึกษาเกี่ยวกับการผสมเทียมภายในมดลูกในแมว 3การศึกษาใช้น้ำเชื้อสด(Howard et al.,Tsutsui et al.)และ1การศึกษาที่ใช้น้ำเชื้อแช่แข็ง (Tsutsui et al.)

3.1 น้ำเชื้อสด

การศึกษาของ Howard et al.,เหนี่ยวนำการเป็นสัดโดยให้ eCG 100IU  ตามด้วยการเหนี่ยวนำการตกไข่ด้วยhCG 80 ชั่วโมงต่อมา ผสมเทียมไปในปีกมดลูกทั้ง2ข้างด้วยอสุจิที่เคลื่อนไหว 2.4-19.2 x10⁶    ตัว(เฉลี่ย = 6.2±0.9x10⁶) ภายใต้การสังเกตผ่านกล้อง คิดเป็น 2ตัวจาก 14ตัว(14%)ที่ได้รับการผสมเทียมมาก่อนตกไข่(25-33ชั่วโมงหลังได้รับ hCG)และ 9ตัวจาก18ตัว(50%)ผสมตามมาหลังตกไข่(31-41ชั่วโมงหลังใหห้ hCG)  Howard et al. แนะนำให้ระงับความรู้สึกด้วย ketamine เพื่อกดการตกไข่และแนะนำให้ดำเนินการผสมเทียมหลังจากการตกไข่เกิดขึ้น

                Tsutsui et al. รายงานการผสมเทียมในมดลูกด้านเดียวคิดเป็น 13%, 31%และ80% ด้วยอสุจิ2 x10⁶   ,4 x10⁶   และ8 x10⁶     ตัวตามลำดับ หนึ่งการผสมเทียมที่ได้ดำเนินการหลังจากการเข้าถึงมดลูกโดย laparotomy ที่ 15,20 หรือ 30 ชั่วโมงตามการให้ hCG  เมื่อผสมเทียมก่อนการตกไข่คิดเป็น 10/18 (56%)ซึ่งสูงกว่าการผสมเทียมหลังตกไข่(5/24, 21%)อย่างมีนัยสำคัญ  ผลที่ได้รับในทางตรงกันข้ามกับที่ได้รายงานไปก่อนหน้านี้โดย Howard et al.  ซึ่งในการตกไข่ถูกเหนี่ยวนำด้วย exogenous gonadotropin  ผลของ Tsutsui et al. แนะนำให้ระงับความรู้สึกด้วย ketamine และ halothaneในช่วงระยะเวลาการเจริญเติบโตของรังไข่ในตามธรรมชาติโดยไม่กดการตกไข่ จำนวนอสุจิที่ Howard et al. ใช้ในการศึกษาอยู่ระหว่าง 2.4 x10⁶   -19.2 x10⁶    ตัว  จำนวนอสุจิที่ต้องการสำหรับการผสมเทียมภายในมดลูกโดยความคิดของ Howard et al.  ไม่สามารถจะเปรียบเทียบโดยตรงกับผลของ Tsutsui et al. ผลจากการศึกษาช่วงหลังชี้ให้เห็นว่าแนวความคิดโดยการผสมเทียมภายในมดลูกในแมว คิดเป็น1/10 ของจำนวนอสุจิที่ต้องการสำหรับการผสมเทียมภายในช่องคลอด อัตราส่วนคล้ายกับที่รายงานในสุนัข จำนวนลูกที่ได้รับในการศึกษาของ Howard et al.  และ Tsutsui et al.เปรียบเทียบกันไม่ได้เนื่องจากการตกไข่ถูกเหนี่ยวนำโดย eCG/hCG  ในการศึกษาอดีตและการผสมเทียมได้ทำในช่วงเวลาที่แตกต่างกันหลังการรักษาด้วยhCGในช่วงการเป็นสัดตามธรรมชาติในการศึกษาต่อมา

3.1.1 เปรียบเทียบการผสมเทียมข้างเดียวกับ 2ข้าง

แม้ว่าผลลัพธ์ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าอัตราที่น่าพอใจจะสามารถบรรลุเป้าหมายหลังจากผสมเทียมข้างเดียวด้วยจำนวนอสุจิที่เคลื่อนที่เพียงพอ ยังไม่ชัดเจนว่าอัตราการปฏิสนธิของไข่ที่ตกจากรังไข่ contralateral ไปยังตำแหน่งผสมเทียมได้เทียบเท่ากับไข่จากรังไข่ ipsilateral  ในความพยายามที่จะตอบคำถามนี้ Tsutsui et al. ตรวจสอบว่าไข่จะมีการปฏิสนธิจากตำแหน่งเดียวด้วยอสุจิ2,4หรือ8 x10⁶   ตัว เข้าไปใน contralateral ปีกมดลูก หลังจากความพยายามของอสุจิที่จะเจาะเข้าไปใน mature follicle ที่ตกจากรังไข่ในด้านที่ผสมเทียม เมื่อใช้อสุจิ 8 x10⁶   ตัว คิดเป็น71%(5/7) เปรียบเทียบกับ14%(3/22)ของแมวที่ผสมโดยใช้อสุจิ 2หรือ4 x10⁶ ตัว อัตราการรอดชีวิตของตัวอ่อนเป็น 100%   3ใน5ตัวของแมวที่ตั้งท้อง(ลูกแมว11ตัวจากการตกไข่ 11ใบ)และ 25%จากแมว2ตัวที่ตั้งท้อง(ลูกแมว2ตัวจากการตกไข่ 8ใบ) อัตราการมีชีวิตรอด 68%(ลูกแมว13ตัวจากการตกไข่ 19ใบ)ในแมวที่ผสมด้วยอสุจิ8 x10⁶  ตัว

3.2 น้ำเชื้อแช่แข็ง

Tsutsui et al. รายงานอัตราการจาก 57% หลังจากผสมเทียมที่มดลูกด้วยอสุจิแช่แข็ง50 x10⁶   ตัวหรืออสุจิที่ละลายจากการเก็บด้วยไฟฟ้าแล้วนำไปแช่แข็ง เมื่อเร็วๆนี้ Tsutsui et al. รายงานว่าตัวเมีย11ตัว มี3ตัว(27%)ตั้งท้องหลังจากผสมเทียมในมดลูกด้านเดียวด้วยอสุจิแช่แข็ง5 x10⁷  ตัว ไข่จากรังไข่ contralatralที่ไปในตำแหน่งที่ใช้ในการผสม ถูกปฏิสนธิอย่างน้อยหนึ่งใบของตัวเมียที่ตั้งท้อง จากการสาธิตแสดงให้เห็นว่าการตั้งท้องจะเกิดหลังจากผสมเทียมด้วยน้ำเชื้อแช่แข็ง อาจจะสำคัญในทางเทคนิคสำหรับการเก็บรักษาเซลล์สืบพันธุ์ของแมวตัวผู้ที่ใกล้สูญพันธุ์

4. การผสมเทียมในท่อนำไข่     adv (อาหารเสริมลดน้ำหนักราคาพิเศษ)

อาหารเสริมราคาส่ง

                การศึกษาการผสมเทียมในท่อนำไข่ในแมว อสุจิไปอยู่ใน ampullaทั้งสองข้างของ uterine tube  ไม่ได้มีการสังเกตการปฏิสนธิหลังผสมเทียมด้วยอสุจิ 5 x10³   หรือ 5 x10⁵    ตัว แต่ ตัวเมีย2ใน8ตัว(25%) ผสมด้วยอสุจิ 2 x10⁶    ตัว และตัวเมีย 3ตัว จาก 7ตัว (43%) ผสมด้วยอสุจิ 4 x10⁶   ตัวไม่ตั้งท้อง  จำนวนอสุจิที่ต้องการในการผสมเทียมที่ท่อนำไข่เกือบจะเท่ากับจำนวนที่ผสมเทียมในมดลูก ด้วยเหตุนี้เมื่อดำเนินการผสมเทียมในท่อนำไข่ จำเป็นที่จะใส่ใจกับจำนวนของอสุจิเช่นเดียวกับสภาวะปกติในท่อนำไข่แมว

สรุป

                แม้ว่าการผสมเทียมในแมวไม่สามารถประเมินได้เพียงพอเพราะมีการศึกษาจำนวนจำกัด ได้รับการยืนยันว่าผสมเทียมได้ด้วยน้ำอสุจิทั้งสดและแช่แข็ง การศึกษาได้แสดงให้เห็นว่าอสุจิที่ผสมเทียมเข้าไปในปีกมดลูก1ข้าง สามารถที่จะโยกย้ายไปยังด้านอื่น ๆ และปฏิสนธิไข่จากรังไข่ contralateral แต่อสุจิจำนวนมากที่จำเป็นสำหรับการผ่าตัดการผสมเทียมภายในมดลูกด้วยน้ำอสุจิสด และอัตราการผสมเทียมภายในมดลูกกับน้ำเชื้อแช่แข็งอยู่ในระดับต่ำ น่าแปลกใจที่ผลของการศึกษาเดียวแนะนำว่าจำนวนของตัวอสุจิที่สูงอาจจะต้องผสเทียมภายในท่อนำไข่แม้อสุจิจะมีความสามารถในการย้ายที่ ซึ่งสภาวะของท่อนำไข่อาจมีผลต่อการปฏิสนธิ ดังนั้นเพื่อให้อัตราการผสมเทียมเกิดขึ้นอย่างสม่ำเสมอและเพื่อเพิ่มการประยุกต์ใช้ เป็นสิ่งสำคัญในการพัฒนาเทคนิคการผ่าตัดที่ไม่ใช่การผสมเทียมที่ตำแหน่งของอสุจิในมดลูก

การผสมเทียมด้วย cryopreserved  sperm  จาก epudidymisของแมวที่เก็บไว้ที่ 4 °C

1.             บทนำ

                ตั้งแต่สัตว์ตระกูลแมวได้ถูกคุกคามจนสูญพันธุ์ มีการศึกษาการนำเทคโนโลยีทางระบบสืบพันธุ์มาอนุรักษ์ไว้ ในความสัมพันธ์นี้ domestic cat ถูกนำมาใช้เป็นตัวอย่างค่อนข้างบ่อย เพื่อช่วยเหลือแมวที่อันตราย มีคนสนใจและได้กำหนดเทคนิคการแช่แข็งอัณฑะและอสุจิจาก epididymis และกำหนดโดยใช้การผสมเทียม, IVF หรือ intracytoplasmic insemination(ICSI)

ในปี 2003 ประสบความสำเร็จได้รับการยอมรับความคิดในการใช้ intrauterine AI(IUAI) ในแมว  จากการละลายอสุจิที่แช่แข็งที่ได้จากส่วนหางของ epididymis  ที่ถูกเก็บมาทันทีหลังจากตัด epididymis ออก  ตั้งแต่นั้นมาอสุจิจาก epididymis  จากสัตว์ตระกุลแมวที่หายากจากหลายๆกรณีที่แมวพวกนั้นตาย สำคัญในการศึกษาความหลากหลายของสภาพของอสุจิก่อนเก็บ เพราะฉะนั้น epididymis ของแมว ถูกเก็บไว้ที่ 4°C นาน 0-48 ชั่วโมงก่อนที่จะแช่แข็งอสุจิ ไม่มีความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการเคลื่อนที่ของตัวอสุจิหลังละลายที่ประมวลผลทันทีหลังจากการผ่าตัดและหลังการจัดเก็บที่4°C 24ชั่วโมง  อย่างไรก็ตามหลังจาก 48 ชั่วโมงของการจัดเก็บที่ 4°C การเคลื่อนที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ

 เป้าหมายของการศึกษา กำหนดอัตราการการตั้งท้องหลังจากการผสมเทียมจากอสุจิที่ได้จาก epidymis ที่ละลายแล้ว ซึ่งถูกเก็บไว้ที่4°C 24ชั่วโมง  ในการศึกษานี้การผสมเทียมถูกทำโดยการศัลยกรรม IUAI และ intratubal AI(ITAI) ซึ่งคาดหวังว่ามีความต้องการอสุจิน้อยกว่า IUAI  โดยสอดท่อ catheter เข้าไปในท่อนำไข่พื่อดำเนินการ ITAIที่มีผลต่อไข่  , ITAI ทำก่อนและหลังตกไข่เพื่อเปรียบเทียบกัน

2.             เนื้อหาและวิธีการ

2.1                           แมว

แมวตัวผู้ 24ตัว พันธุ์ผสม อายุ 2.0±1.3ปี, น้ำหนัก 5.0±0.8kg ถูกนำมาที่โรงพยาบาลสัตว์เพื่อตัดอัณฑะออก   เพื่อใช้ epididymis  แมวตัวเมีย 24ตัว อายุ 2.2±1.4ปี , น้ำหนัก 3.1±1.4 kg จากกลุ่มงานวิจัยเพื่อใช้ในการผสมเทียม แมวแต่ละตัวมีกรงอยู่ขนาด 12x50cmxสูง70cm ให้อยู่ในห้องกับแมวตัวผู้วันละ2ครั้ง (เช้าและเย็น) เพื่อตรวจสอบอาการของการเริ่มเป็นสัด

ให้อยู่ในห้องอุณหภูมิ 22-23°C ช่วงมีแสง12ชั่วโมง(ช่วงมีแสงในเวลา 7.00)และไม่มีแสง12ชั่วโมง  พร้อมกับให้ ad libitum ไปในอาหารแมวและน้ำดื่ม การศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการให้สอดคล้องกับแนวทางการศึกษาสัตว์ ของ Nippon Veterinary and Life Science University

2.2                           การเก็บรักษา epididymis และ การเก็บอสุจิ

อัณฑะ และepididymis ถูกทำให้ปลอดเชื้อทันทีหลังตัดออกและเก็บทันทีที่ 4°C 24ชั่วโมง หลังจากนั้นชั่งน้ำหนัก อัณฑะและepididymis,ส่วนหางของepididymis ถูกสับละเอียดใน 1มล.ของ20% egg York tris fructose citrate solution(YET-FC) ที่อุณหภูมิห้องและอสุจิถูกทำให้กลับคืนสู้สภาพเดิมโดยกรองผ่านตะแกรงสแตนเลส(80µl)

2.3                           ประเมิณคุณภาพอสุจิ

น้ำเชื้อถูกนำไป ปั่นเหวี่ยง (1200xg) 5 นาที และเอาส่วนที่ลอยอยู่เหนือผิวออก แล้วเติม exterder 200µl ไปในน้ำเชื้อ ประเมินเปอร์เซ็นต์การเคลื่อนไหวของอสุจิที่เคลื่อนที่ไปข้างหน้าบ่นแผ่นทดสอบคุณภาพของน้ำเชื้อ และนับจำนวนอสุจิ, ดูเปอร์เซ็นต์การรอดชีวิตของอสุจิ,รูปร่างความผิดปกติของอสุจิ

2.4                           การแช่แข็งอสุจิ

น้ำเชื้อที่แขวนลอยอยู่ใน EYT-FC ก่อนแช่แข็ง ขั้นแรกหลังจากประเมินน้ำเชื้อเบื้องต้น  เจือจางน้ำเชื้อก่อนอันดับแรกที่ 20°C ปรับความเข้มข้นของอสุจิเป็น 1 x10⁸  มล. และรักษาอุณภูมิใน water bath ไว้ที่ 4°C นาน 1 ชั่วโมง สำหรับการเริ่มต้นในการ cooling , ขั้นที่2 เมื่อเจือจางเสร็จแล้วนำมาหยดลงให้มีปริมาณเท่ากับของ secondary exterder , EYT-FC เติม 14% glycerol และ2% Orvus Ec Paste(OEP)ที่ 4°C ประมาณ 5นาที หลังจากขั้นที่2และเจือจางขั้นสุดท้าย , ความเข้มข้นของอสุจิ,  glycerol และ OEP อยู่ที่ 5 x10⁷    /ml , 7%และ 1% ตามลำดับ ดังนั้น 200µl ของน้ำเชื้อถูกนำมาใส่ใน straw  250µl และ ทำให้เท่ากันด้วย glycerol ที่ 4°C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แล้วนำstraw ไปแช่แข็งใน  liquid nitrogen(LN₂) ในกล่องโฟม (30.5x23x16 cm.) ในระดับ 5 cm และจัดเรียง straw ให้อยู่ในแนวนอน 7cm เหนือผิวของ LN₂   หลังจากสัมผัสกับไอระเหยของ  LN₂ เป็นเวลา 10 นาที นำ strawจุ่มลงไปใน LN₂   เป็นขั้นตอนสุดท้ายในการแช่แข็งและเก็บรักษา

2.5                           การเหนี่ยวนำการตกไข่

เหนี่ยวนำการตกไข่โดยใช้ hCG 100 IU(Gonadotropin 1000,Aska Phamaceutical Co.,Ltd.,Tokyo,Japan)  ให้ทางชั้นใต้ผิวหนัง(SC)  3หรือ 4วันในช่วงการเป็นสัด ก่อนการผสมเปิดรังไข่โดย laparotomyและตรวจสอบสายตาเพื่อตรวจสอบว่ามีการตกไข่เกิดขึ้น แมวที่มีfollicleก่อนการตกไข่(มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางมากกว่าหรือเท่ากับ 3mm) ให้ฉีด 100 IU hCG เข็มที่2ทันทีหลังการผ่าตัด

2.6                           การผสม

2.6.1                   การระงับความรู้สึก

ก่อนการรักษาให้ medetomidine hydrochloride(Dumitol 0.05 mg/kg i.m.) การระงับความรู้สึกถูกเหนี่ยวนำด้วย ketamine hydrochloride (Ketalor 5mg/kg) และคงสภาพการหมดความรู้สึกด้วย isoflurane(ISOFLU) ทำทันทีหลังผสมเทียม ถ้าแมวตื่นตัวรักษาโดย antipramezole hydrochloride 0.125 mg/kg

2.6.2                   การผสมเทียมในมดลูก

การผสมเทียมในมดลูกดำเนินการ 20ชั่วโมงหลังรักษาด้วย hCG  น้ำเชื้อที่ใช้ได้จาก epididymis ที่เก็บได้ทันทีหรือเก็บไว้ที่ 4°C 24ชั่วโมง ก่อนแช่แข็ง, 4 straws(อสุจิ 40 x10⁶  ตัว)ใช้สำหรับ unilateral intrauterine AI(UIUAI), น้ำเชื้อถูกนำมาละลายในน้ำอุ่นที่37°C นาน 30วินาที และหลังจากประเมินการเคลื่อนไหวของน้ำเชื้อ,ความอยู่รอดและเปอร์เซ็นต์ของลักษณะรูปร่าง อสุจิที่ผิดปกติ เมื่อนำไปปั่นเหวี่ยงที่ 1200g นาน 5นาที , เอาส่วนที่ใสออกและอสุจิที่คงเหลือ 40 x10⁶  ตัว/50µlที่จะใช้ใน UIUAI ,ทำventral midline laparotomy ตรวจสอบรังไข่และปีกมดลูกว่ามี follicle (มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางมากกว่าหรือเท่ากับ 3mm )ที่พบก่อนการตกไข่ จึงทำการผสมได้

2.6.3                   การผสมเทียมภายในท่อนำไข่

        ตั่งแต่มีรายงานที่ผ่าน การตกไข่ในแมวเกิดขึ้น 27-28ชั่วโมง หลังฉีด hCG, ITAI ดำเนินการได้ 24หรือ 30ชั่วโมงตามลำดับ, หลังให้hCG  น้ำเชื้อที่ใช้ได้จากepididymis ที่เก็บที่4°C เป็นเวลา 24ชั่วโมงก่อนก่อนแช่แข็งและใช้ 1 straw (อสุจิ10x x10⁶   ตัว) ใช้สำหรับ unilateral intatubal AI(UITAI) น้ำเชื้อที่ละลายแล้ว ประเมินคุณภาพน้ำเชื้อและ นำน้ำเชื้อไปปั่นเหวี่ยงตามที่อธิบายไว้ , สำหรับการทำ UITAI ใช้อสุจิที่เหลือ10 x10⁶    ตัว/30µl ต้องทำ  ventral midline laparotomy และ UITAI ทำโดยสอด catheter ไปใน ampulla ของท่อนำไข่ที่ตำแหน่งใกล้เคียงกับ frimbriae tubae  ประมาณ3cm  จำนวน follicle หรือCL มีเส้นผ่าศูนย์กลางมากกว่าหรือเท่ากับ 3mm

2.7                           การวินิจฉัยการตั้งท้อง

         ตรวจสอบการตั้งท้องในแมวด้วยการอัลตราซาวด์โดยใช้ real-time,B-mode (ECHOvision SSD-500 EV 7.5 MHz) 15วันหลังจากผสมเทียม สำหรับแมวที่ไม่ท้อง เชื่อว่าความเข้มข้นของ plasma progesterone (P4)กำหนดโดย EIA, 20วันหลังผสมเทียม แมวจะมีความเข้มข้นของ plasma P4 มากกว่าหรือเท่ากับ 5mg/ml ถือว่ามีการทำงานของ CL

2.8                           การวิเคราะห์ทางสถิติ

         ข้อมูลการเคลื่อนไหวของ sperm, ความอยู่รอดและเปอเซ็นต์ความผิดปกติของรูปร่างอสุจิใน 0และ 24ชั่วโมงเก็บข้อมูลในกลุ่ม UIUAIและใน24ชั่วโมงและ 30ชั่วโมงหลังฉีด hCGในกลุ่ม UIUAI เปรียบเทียบโดย student’s t-test  เปอร์เซ็นต์คุณภาพของอสุจิที่เปลี่ยนรูปโดย arcsine-square root tranfomation ก่อนนำมาวิเคราะห์ อัตราการตั้งท้องใน 0และ 24ชั่วโมงที่เก็บข้อมูลในกลุ่มUIUAIและใน 24ชั่วโมงและ30ชั่วโมงหลังฉีด hCG เก็บข้อมูลในกลุ่มUIUAI เปรียบเทียบโดย Fisher’s exact probability test สำหรับการวิเคราะห์,P<0.05 คำนึงถึงความสำคัญของข้อมูลแสดงชัดเจนเป็น  mean±SD

3.             ผลการทดลอง

3.1 การเหนี่ยวนำการตกไข่

                จำนวนของ mature follicle และ CL ที่สังเกตในระหว่างการผ่าตัด (ตารางที่1และ2)แมวที่ใช้ UIUAI(n=14),เช่นเดียวกับการผสมที่ 24 ชั่วโมง หลังฉีด hCG (n=5)สำหรับ UIUAI, อยุ่ในระยะก่อนการตกไข่ในเวลาที่ทำผสม ,ฉีด hCG ปริมาณที่2เพื่อเหนี่ยวนำการตกไข่  ในแมวทั้งหมดผสมทางท่อนำไข่ 30ชั่วโมงหลังจากฉีด การตกไข่เกิดขึ้นในเวลาผ่าตัด(สังเกตเห็น CL เท่านั้น)

3.2 คุณภาพอสุจิและอัตราการตั้งท้องโดย UIUAI

                คุณภาพของอสุจิไม่มีความแตกต่างกันในการเคลื่อนไหว,ความอยู่รอดหรือลักษณะที่ผิดปกติของอสุจิที่เก็บที่4°C เป็นเวลา  0หรือ 24ชั่วโมง(ตารางที่1) หลังจากที่ทำ UIUAI ด้วยน้ำเชื้อที่ได้จาก epididymis ที่เก็บที่ 4°C เป็นเวลา 0หรือ 24ชั่วโมง อัตราการตั้งท้องอยู่ที่2ใน7(28.6%) แบ่งเป็น2กลุ่ม  แมว2ตัวที่ตั้งท้องในกลุ่มที่ได้รับน้ำเชื้อที่เก็บไว้ที่  0 ชั่วโมง ส่งผลให้มีลูกแมว 1ละ 2 ตัว (หลังจากผสมเทียม 71วันทั้ง2ตัว) แมวที่ตั้งท้องที่ได้รับน้ำเชื้อที่เก็บไว้ที่ 24 ชั่วโมง แท้งใน30วันหลังผสมเทียม ในขณะที่ตัวอื่นๆได้ลูกแมว1ตัวที่72วัน

3.3 คุณภาพของอสุจิและอัตราการตั้งท้องโดย UIUAI

                คุณภาพของอสุจิไม่มีความแตกต่างกัน (การเคลื่อนไหว,ความอยู่รอดหรือลักษณะรูปร่างที่ผิดปกติ)จากการใช้อสุจิผสมเทียมที่24หรือ 30ชั่วโมง หลังฉีดhCG (ตารางที่2)อัตราการตั้งท้องหลังทำ UIUAI เป็น 4/5 (80%) และ  1/5 (20%) 24 และ 30ชั่วโมงตามลำดับหลังฉีด hCG  1ใน 4 ของแมวที่ตั้งท้อง 24ชั่วโมงหลังฉีด hCG คลอดลูกแมว 1ตัว หลังผสมเทียม 72วัน,  อีกกลุ่มหนึ่งก็คล้ายกัน คือ มีลูกแมว 2ตัวหลังผสมเทียม60วันและเกิดการแท้งที่29วันและ30วันหลังผสมเทียม ในกลุ่มที่ฉีด hCGได้ลูกแมว4ตัวหลังผสมเทียม 66วัน  ความเข้มข้นของ Plasma P4 พบในแมวที่ไม่ตั้งท้อง(ตารางที่1และ2)

สรุป

ในการศึกษาไม่พบความแตกต่างกันของคุณภาพของน้ำเชื้อแช่แข็งที่ 0กับ 24ชั่วโมง เก็บที่ 4°Cสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้  อย่างไรก็ตามอัตราการตั้งท้องหลังทำ UIUAI ด้วยอสุจิจาก epididymis ที่แช่แข็งแล้วนำมาละลาย(28.6%) ต่ำกว่าหลังจากการทำ UIUAI  โดยอสุจืที่ได้จากการกระตุ้นด้วยไฟฟ้า(70%) แต่ก็มีความคล้ายกันในผลก่อนหน้านี้ของอสุจิแช่แข็งที่ได้จาก epididymis  (27.3%) ,การเพิ่มการผสมอาจจะเพิ่มอัตราการตั้งท้อง นี่เป็นข้อจำกัดของการใช้จำนวนอสุจิจำนวนน้อยๆที่เก็บได้จากส่วนหางของ epididymis ในแมวตัวผู้(เฉลี่ย 77.8±7.2 x10⁶  )

Intravaginal AI (IVAI)และITAI เป็นทางเลือกหนึ่งของ IUAI ในแมว  IUAI เป็นวิธีที่พอใจสำหรับการผสมในสัตว์เล็กและมีอสุจิจำนวนน้อย เพราะฉะนั้นในการศึกษาพบว่า ทำUITAI  ด้วยอสุจิ10 x10⁶    ตัว อัตราการตั้งท้องจาก UIUAI เหมือนกับในกลุ่ม 0 และ 24ชั่วโมงเฉพาะกลุ่มที่ทำโดยUIUAIเท่านั้น  ผลของ conception rate สูงเป็นที่น่าสังเกตโดยเฉพาะอย่างยิ่งการทำ UITAI 24 ชั่วโมงหลังฉีด hCG  การกระแทกในแมวเหมือนกันในITAI เป็นวิธีการผสมเทียมที่ดีกว่าด้วยอสุจิที่ได้จากส่วนหางของ epididymis ของแมว เพราะสัตว์มีจำนวนน้อย ไม่ได้มีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติสามารถทำการศึกษาต่อกับสัตว์อื่นๆ ถึงจะได้ข้อสรุปที่ชัดเจน

แมวทั้งหมดตกไข่ในเวลาของการผ่าตัดใน 30 ชั่วโมง ITAI เป็นกลุ่มที่มีความสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ว่าการตกไข่เกิดขึ้น 27-28 ชั่วโมงหลังจากฉีด hcg  อย่างไรก็ตามเนื่องจากอัตราการตั้งท้องในกลุ่มนี้ต่ำ การทำ ITAI ควรจะทำก่อนการตกไข่

 การแท้งเกิดขึ้นประมาณวันที่ 30 ของการตั้งท้อง 3ใน9ตัวตั้งท้องหลังจาก UIUAI หรือ UITAI  กรณีที่แท้งยืนยันได้หลังจากทำ IVAI และIUAIด้วยน้ำเชื้อสดรวมทั้งการทำIUAIด้วยน้ำเชื้อที่ได้จากการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าและน้ำเชื้อที่ได้จาก epididymis ดังนั้นเราจึงสรุปว่าการแท้งที่เกิดขึ้นในการศึกษาปัจจุบันไม่ได้เนื่องมาจากเก็บรักษา epididymis ในอุณหภูมิต่ำ

สรุปการตั้งท้องเกิดขึ้นเป็นหลังจากการทำ UIAI ของตัวอสุจิแช่แข็งที่ได้จากส่วนหางของ epididymisแล้วนำมาละลาย จัดเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำเป็นเวลา 24 ชั่วโมง อย่างไรตามการใช้อสุจิจากแหล่งเดียวกันทำให้อัตราการตั้งท้องสูงขึ้น การผสมเทียมโดย ITAI นิยมมากขึ้น ลดปริมาณการผสมลงและมีมีอัตราการตั้งท้องในแมวสูง

การผสม น้ำเชื้อสดในUnilateral intrauterine Horn ในแมว

                   การศึกษาในการผสมเทียมในแมวประกอบด้วย 3รายงาน ใน intravaginal insemination(IVI)และ 1รายงานใน intrauterine insemination (IUI) ในการศึกษา IVI เป็นการศึกษาที่รายงานโดย Plat et al. ทำการศึกษาโดยใช้น้ำเชื้อแช่แข็ง และการศึกษาอื่นๆโดยใช้น้ำเชื้อสด  Sojka et al.ประสบความสำเร็จโดยการผสมอสุจิ 1.25 x50 x10⁶     ตัวในช่องคลอด รายงานว่า  3ใน7ตัว ผสมด้วยอสุจิ 5 x10⁶     ตัวและคิดเป็น 42.9% แต่มีการศึกษาใน IVI  คิดเป็น 6.6%,33.3%และ 77.8%  ด้วยอสุจิ 20 x10⁶    ตัว, 40 x10⁶   ตัวและ 80 x10⁶ ตามลำดับ อย่างไรก็ตามมีความต้องการอสุจิจำนวนมากจากการได้รับการผสมเทียมโดย IVI

Howard et al.  ได้แสดงจำนวนอสุจิที่ใช้จำนวนน้อยด้วยอสุจิ 2.4x19.2 x10⁶  ตัว  ในปีกมดลูกแต่ละด้านทั้งด้านซ้ายและด้านขวาแต่ยังมีการศึกษาไม่ชัดเจนถึงจำนวนอสุจิที่ต้องการ การได้รับการผสมเทียมหลังตกไข่(50%)คิดเป็น 3.5 เท่า ซึ่งสูงกว่าการผสมเทียมก่อนการตกไข่(14.3%) การตกไข่เกิดขึ้นหลังหลังฉีด hCG  25-27ชั่วโมง อย่างไรก็ตามแนะนำให้ผสมเทียมทันทีหลังตกไข่ 30-35ชั่วโมงหลังให้ hCG

มีรายงานการผสมเทียมในแมวค่อนข้างน้อยและยังพบปัญหาที่แก้ไม่ได้ ออกแบบการศึกษาถึงความต้องการอสุจิที่คิดเป็น 80%โดยการทำ IUI จากน้ำเชื้อสด  ทำการสำรวจอัตราการได้รับการผสมเทียมก่อนและหลังการตกไข่รวมถึงความสมบูรณ์พันธุ์ของไข่ที่ตกใน contralateral ปีกมดลูก เพื่อผสมใน unilateral IUI(UIUI) ซึ่งมีรายงานก่อนหน้านี้ในสุนัข  IUIจึงทำเพียงด้านเดียว

เนื้อหาและวิธีการ

สัตว์

                ในการศึกษาใช้แมวพันธุ์ผสมและแมวที่อยู่ในความดูแล เป็นแมวตัวเมีย 36ตัว อายุ 1-7ปี เป็นแมวที่ใช้บ่อยเพราะแมวบางตัวใช้ซ้ำได้   ทดลองใน44 การทดลอง สำหรับแมวตัวผู้ ใช้ 7ตัว อายุ 2-12ปี ที่คุณภาพของน้ำเชื้อปกติ, มีประสิทธิภาพการผสมพันธุ์และมีความสมบูร์พันธุ์  ให้แมวตัวผู้อยู่ในกรงขนาด 60x90x12cm ในห้องที่อุณหภูมิ 23±2°C และแมวตัวเมียอยู่รวมกันในห้องขนาด 4x7m จัดการให้ตัวเมียอยู่ภายใต้แสงธรรมชาติ ทดลองทำในระหว่างฤดูผสมพันธุ์ระหว่างเดือนมกราคมและสิงหาคม จัดอาหาร(Hill’s feline maintenance,U.S.A)และน้ำผสม ad libitum  โดยให้แมวตัวเมียและตัวผู้อยู่ร่วมกันทุกๆวันในตอนเช้าและเย็นแล้วสังเกตการเป็นสัด

การเก็บน้ำเชื้อและการทดสอบคุณภาพของน้ำเชื้อ

                น้ำเชื้อที่เก็บได้จากการใช้ Artificail Vagina(AV) ขณะที่แมวเพศผู้ขึ้นขี่ตัวเมียในระยะเป็นสัดและเริ่มกระแทก   จับ penis เข้าไปใน AV โดยจับระหว่างนิ้วชี้และนิ้วกลางและเหนี่ยนำให้หลั่งน้ำเชื้อออกมา  นำน้ำเชื้อไปประเมินคุณภาพโดยทดสอบโดยทั่วไปตามที่มีรายงานก่อนหน้านี้ ตัวอย่างน้ำเชื้อต้องมีอสุจิที่เคลื่อนไหว80% หรือมากกว่าที่จะใช้ในการผสมเทียม น้ำเชื้อจะถูกเก็บรักษาไว้ในอุณหภูมิ 20°Cนาน 1ชั่วโมง  จนกระทั่ง IUI

วิธีการเหนี่ยวนำการตกไข่

                เหนี่ยวนำการตกไข่โดยให้ hCG 100IU x2หรือ 250IU  2-4วันในช่วงที่เป็นสัดโดยฉีดเข้าทาง jugular vein  ในกลุ่มที่ให้ hCG  100IU x2 ทำการผสมเทียมหลังจากการให้ครั้งแรก แมวที่ได้รับการผสมก่อนการตกไข่ให้ฉีดครั้งที่2ทันทีหลังผสม ในขณะที่ได้รับการผสมหลังตกไข่ไม่ต้องฉีดครั้งที่2  เพื่อประเมินความสำเร็จในการเหนี่ยนำการตกไข่ โดยวัดระดับของ peripheral progesterone (P) 15วันหลังจากฉีด hCG จาก EIA ในแมวก่อนการตกไข่เพื่อผสมเทียมยกเว้นในตัวที่ตั้งท้องและการเหนี่ยวนำการตกไข่ประสบความสำเร็จเมื่อระดับ Pเพิ่มขึ้น

การผสมเทียม

                การผสมเทียมภายใต้การระงับความรู้สึก15,20หรือ30ชั่วโมงหลังฉีด hCG เพื่อเนี่ยวนำการตกไข่ สำหรับการระงับความรู้สึกทำหลังจากให้ Atropine sulfate(0.05 mg/kg)และ acepromazine maleate(0.025 mg/kg), Ketamine(5 mg/kg)ให้เมื่อเหนี่ยวนำการระงับความรู้สึกได้ผลแล้ว และคงระดับการหมดความรู้สึกด้วย halothane  

                จำนวนอสุจิที่ใช้ผสมเทียมแตกต่างกัน 3จำนวน คือ 2 x10⁶    (การทดลองที่1), 4 x10⁶(การทดลองที่2)     และ8 x10⁶   (การทดลองที่3)  โดยผสมเทียม16 ตัว,17ตัว,และ11ตัวตามลำดับ

ปริมาตรของน้ำเชื้อในการผสมเทียมถูกปรับให้เท่ากันเป็น30µl ใน egg york  tris fructose citrate solution  การทำIUI มีรายงานก่อนหน้านี้ในสุนัข หลังจากได้รับการยืนยันจำนวนของmature follicleและการตกไข่จากรังไข่ด้านซ้านและด้านขวา  น้ำเชื้อที่ใช้ในการผสมเทียมเข้าไปในปีกมดลูกค่อนข้างมาก ใช้เข็มเบอร์18สอดเข้าไปบริเวณตรงกลางของปีกมดลูกและปล่อยอสุจิที่ปลายของปีกมดลูกซึ่งประกอบไปปลายเข็มเบอร์20ที่เชื่อมต่อกับเข็มฉีดยา 1 มล.  mature follicle อย่างน้อย1ใบที่ตกจากในรังไข่ทั้ง2ข้าง พิจารณาหลังการตกไข่ เส้นผ่านศูนย์กลางของไข่ 4 mmหรือมากกว่าคาดคะเนการตกไข่จากการฉีด hCGครั้งที่2

วินิจฉัยการตั้งท้อง

                ประเมิน 15วันหลังผสมเทียม โดยวินิจฉัยจากภาพอัลตราซาวด์(ALOKA ECHO VISION SSD-500EV) สังเกตการพัฒนาของ ตัวอ่อนทุกๆ 5วันหลังยืนยันการตั้งท้อง สามารถนับจำนวนลูกแมวได้

การวิเคราะห์ทางสถิติ

                Test

ผลการทดลอง

                การเหนี่ยวนำการตกไข่

                                ระยะการตกไข่แสดงในตารางที่1 จาก44การทดลอง การตกไข่ไม่ได้เกิดขึ้นทั้งในกลุ่ม100 IU(x2)หรือกลุ่ม 250 IU อัตราการเหนี่ยวนำการตกไข่ทั้งหมด เป็น 95.5% ใน2กลุ่มที่ไม่ตกไข่ สังเกต ovarian follicle 4และ 5ใบที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 4 mmหรือมากกว่าตามลำดับ อัตราการเหนี่ยวนำการตกไข่ เป็น 41.2% หลังจากฉีด hCG15ชั่วโมงและ 38.5% หลังฉีด 20ชั่วโมงในกลุ่ม 100 IUหรือ 250 IU จาก hCG  เป็น 100% ใน 12ตัว

                ผลของ conception rate

                                ผลของ UIUI ที่แสดงในตารางที่2 คิดจาก2ใน16ตัว (12.5%) ในการทดลองที่1, 5ตัว ใน 16ตัว(31.3%) ในการทดลองที่2,และ8ใน10ตัว(80%)ในการทดลองที่3 ดังนั้น conception rate ของจำนวนอสุจิที่ใช้ผสมในการทดลองที่3สูงที่สุด

                ระยะของการตกไข่และ conception rate

                                ความสัมพันธ์ระหว่างระยะการตกไข่ ในการผสมเทียมและconception rate แสดงในตารางที่3 ในการทดลองที่1conception rate ได้จากการผสมก่อนการตกไข่ 25%แต่ conception rate ไม่ได้จากหลังตกไข่ , conception rate ได้จากการผสมก่อนและหลังตกไข่ คิดเป็น 60%และ 18.2% ในการทดลองที่2และ 100%และ 60%ในการทดลองที่3 ดังนั้น conception rate ได้จากการผสมก่อนการตกไข่สูงกว่าหลังตกไข่

                จำนวนของลูกแมวและระยะเวลาการตั้งท้อง

                                จำนวนลูกแมวและระยะเวลาการตั้งท้องแสดงในตารางที่4 การแท้งเกิดขึ้น 4ใน15ตัวที่ผสมในการทดลองที่1  จำนวนลูกแมวเป็น4ตัว และระยะเวลาการตั้งท้องเป็น68วัน , ในการทดลองที่2จำนวนลูกแมว 1-4ตัว และระยะเวลาการตั้งท้อง 66-68วัน , ในการทดลองที่3 จำนวนลูกแมว 2-5ตัว และระยะเวลาการตั้งท้อง 65-69วัน อย่างไรก็ตามไม่มีความแตกต่างในกลุ่มของลูกแมวและระยะเวลาในการตั้งท้อง

                จำนวนลูกแมวเปรียบเทียบกับจำนวนของตกไข่ในด้านที่ผสม

                                จำนวนลูกแมวจาก 15ตัว จำนวน อสุจิที่ผสมเปรียบเทียบกับจำนวนตกไข่(หรือ mature follicle)แสดงในตารางที่4 จำนวนลูกแมวมากกว่าจำนวนของการตกไข่(รวมทั้งmature follicle) ในการผสมทั้ง2ด้านของ 2ตัว(100%)ในการทดลองที่1, 2ใน5ตัว(40%)ในการทดลองที่2, 4ใน8ตัว(50%)ในการทดลองที่3 อย่างไรก็ตามไม่มีความแตกต่างในจำนวนอสุจิที่ใช้ในการผสมซึ่งจำนวนของลูกแมวที่มากกว่าจำนวนการตกไข่ในด้านที่ผสม

สรุป

                เวลาของการตกไข่หลังให้ hCG ทั่วไปอยู่ที่25-27ชั่วโมง แต่ในการศึกษาครั้งนี้ สังเกตในปริมาณ 40%ของแมวทั้ง 15และ 20ชั่วโมงหลังฉีด hCG  แนะนำให้เพิ่มลำดับเวลาของการตกไข่หลังฉีด hCGในแมว เพราะแมวในการศึกษาแบ่งเป็นกลุ่มและมีความเป็นไปได้ที่จะเกิดการตกไข่ที่เกิดขึ้นเองในแมวบางตัวได้ การเหนี่ยวการตกไข่โดยใช้ hCGใน2ตัว ไม่คำนึงถึง ovarian follicle ที่วัดได้ 4mmหรือใหญ่กว่า เหตุผลที่ไม่ประสบผลสำเร็จคือไม่รู้การตกไข่

                ในการศึกษานี้คิดจาก IUI จากน้ำเชื้อสดในแมวเป็น 31.3% และ 80% ที่นับจำนวนอสุจิจาก 4 x10⁶  และ 8 x10⁶  ตัวตามลำดับ มีรายงานก่อนหน้านี้ จำนวนของอสุจิที่ผสมเทียมโดย IVI ด้วยอสุจิ 40 x10⁶    และ80 x10⁶  ตัว คิดเป็น 33.3%และ77.8%ตามลำดับ ดังนั้นแสดงให้เห็นว่าจำนวนอสุจิที่ต้องการในการปฏิสนธิโดย IVI คือ 80 x10⁶  ตัว ,จำนวนอสุจิที่ต้องการในการปฏิสนธิโดย IUI คือ 80 x10⁶  ตัว ทั้ง2วิธีมีความสัมพันธ์กันในความต้องการจำนวนอสุจิที่เพื่อปฏิสนธิเหมือนกับในสุนัขในการศึกษาของ Tsutsui et al.

                เป็นการยากที่จะเปรียบเทียบผลของการศึกษาของ Tsutsui et al. ด้วยIUI ในแมวที่ทำโดย Howard et al.   เพราะเป็นการนับอสุจิที่ผสมเทียมในการศึกษาตั้งแต่ 2.4x10⁶  ถึง19.2x10⁶  ตัว แต่ Tsutsui et al.แนะนำให้ผสมเทียมหลังตกไข่มากกว่าก่อนตกไข่ สำหรับการการระงับความรู้สึกว่าในช่วงเวลาของ mature follicle ที่มีผลต่อการตกไข่ การระงับความรู้สึกในการศึกษานี้ก็เหมือนกับที่ใช้โดย Howard et al.  แต่อัตราการได้รับการผสมก่อนตกไข่ชัดเจนมากกว่าการผสมหลังตกไข่ แตกต่างกับผลของ Howard et al.  เหตุผลที่อัตราการได้รับการผสมต่ำจากการผสมหลังตกไข่ไม่ชัดเจนเพราะไม่รู้การตกไข่ที่เกิดขึ้นก่อนการผสม นอกจากนี้การตกไข่เกิดขึ้นใน 18ใน20ตัว ที่ระงับความรู้สึกก่อนการตกไข่(90%)ในการศึกษานี้, การระงับความรู้สึกไม่มีผลต่อการตกไข่(ตารางที่2) แต่ปริมาณของ hCGที่ใช้เหนี่ยวนำการตกไข่สูงกว่าการศึกษาของ Howard et al. (75หรือ 100IUของhCG) และเป็นอีกทางเลือกหนึ่งถือว่าเป็นเหตุผลสำหรับความแตกต่างระหว่าง2การศึกษา

                ในการศึกษานี้อสุจิที่ถูกผสมเข้าไปในมดลูก 1ใน3 ของจำนวนอสุจิ และปฏิสนธิกับไข่ที่ตกจากมดลูก โดยไม่คำนึงถึงจำนวนของอสุจิ จุดนี้ไม่สามารถเปรียบเทียบกับการศึกษาของ Howard et al.  เพราะว่าอสุจิที่จะผสมเข้าไปในปีกมดลูกทั้ง2ข้าง มีการแสดงผลก่อนหน้านี้ในสุนัขหลังทำ UIUI ด้วยอสุจิ20 x10⁶     ตัวหรือมากกว่า ปฏิสนธิในด้านที่ไข่ตก เพิ่มอัตราการผสมติด มีความจำเป็นที่จะต้องผสมทั้ง2ด้านโดยIUI

                จำนวนอสุจิที่ต้องการในการปฏิสนธิโดย UIUI คือ 8 x10⁶     ตัว